如今社会的发展速度最快,蛋白质含量常规检测是大家最为关注的问题。
在众多的蛋白质含量常规检测方法当中,蛋白质的理化性质及反应众多,光是显色反应就达十余种,每一种或一类性质就意味着一条检测途径,因此能够用于检测蛋白质的方法多种多样。那么,蛋白质的检测方法有哪些?
(一)蛋白质的盐析 取1.5mL 蛋白质溶液,加入等体积饱和硫酸铵溶液(浓度为50%饱和),微微摇动试管, 使溶液混合均匀后,静置数分钟,球蛋白即析出呈絮状沉淀(如无沉淀可再加少许饱和硫酸 铵),用滤纸滤取上清液,滤液中再加入固体硫酸铵粉末至不再溶解,析出的即为清蛋白,再 加水稀释,观察沉淀是否溶解。
(二)蛋白质的沉淀
1.用重金属盐沉淀蛋白质 取三支试管,各加1mL 蛋白质溶液,分别各加3 滴6%醋酸铅溶液、3 滴2%硫酸铜溶 液和3 滴1%硝酸银溶液,观察蛋白质沉淀的析出。
2.用有机酸沉淀蛋白质 取二支试管,各加1mL 蛋白质溶液,并加5%醋酸溶液使之呈酸性(该沉淀反应最好在 弱酸中进行)。然后分别滴加饱和苦味酸、饱鞣酸溶液,直至沉淀产生为止。 用10%三氯醋酸溶液、3%磺柳酸溶液进行类似实验(用量同前),观察现象。 (三)蛋白质的颜色反应
1.黄蛋白反应 于试管中,加1mL 蛋白质溶液和10 滴浓硝酸溶液,直火加热煮沸,观察溶液和沉淀颜色。 冷却后,再加入20 滴10%氢氯化钠溶液,观察颜色变化。
2.与茚三酮的反应 在二支试管中,分别加1%赖氨酸溶液和1mL 蛋白质溶液,分别加2 滴茚三酮溶液,加 热至沸,观察有什么现象?
3.与硝酸汞试剂作用——米伦反应 在二支试管中,分别加 1mL 0.5%苯酚溶液和1mL 蛋白质溶液,再各加 0.5mL 米伦试剂 (不可太多),苯酚溶液出现玫瑰红色,而蛋白质溶液加热后出现沉淀,加热凝固的蛋白质呈 砖红色,有时溶液也呈红色。
4.蛋白质的双缩脲反应
(1) 双缩脲的生成 于干燥试管中,加0.2g~0.3g 尿素,微火加热,尿素熔化并形成双缩脲,放出的氨可用 红色石蕊试纸试验。试管内有白色固体出现后,停止加热。
(2) 双缩脲反应 上述产物冷却后,加1mL10%氢氧化钠溶液,摇匀,再加2 滴2%硫酸酮溶液,混匀,观察 有无紫色出现。 于试管中,加1mL 清蛋白溶液和1mL10%氢氧化铜溶液,再加
1 滴~
2 滴2%硫酸铜溶液共 热,由于蛋白质与硫酸铜生成络合物而呈紫色。取1%赖氨酸溶液作对照,观察颜色变化。
(四) 核蛋白组成的鉴定
1.核蛋白的水解 取20mL 酵母核蛋白混悬液于离心管中离心分离,弃去清液,将沉淀转入小烧杯中,加 15mL 5%硫酸,盖上表面皿在水浴上煮沸约1h(煮沸过程中保持原有体积),水解毕,离心分 离,取上层清液作以下检查。
2.核糖的鉴定 于试管中,加 1mL 20%间苯二酚盐酸溶液,以小火加热至沸,迅速加入 5 滴水解液, 呈现红色,(如红色不显可再稍加热)。
3.磷酸的鉴定 取10 滴水解液,置于试管中,加5 滴7%钼酸铵溶液和2 滴浓硝酸溶液,小心于火上 加热,即有黄色沉淀生成。
4.嘌呤与嘧啶的鉴定 取约4mL 水解液,置于小烧杯中,加入氨水至微碱性,过滤,在滤液中加1mL 5%硝酸 银铵溶液,静置片刻,即有絮状的嘌呤或嘧啶银盐沉淀生成。 注意事项 米伦试剂是硝酸、亚硝酸、硝酸汞及亚硝酸汞之混合物,能与苯酚及某些酚类起颜色反应。
通过以上对蛋白质的检测方法有哪些的简单介绍,大家应该对这些有所知道了吧。
这里要提醒的是:当大家在生活中不幸被蛋白质的检测方法疾病所困扰之后,必须要注意把握好治疗蛋白质的检测方法疾病的方向,从原理的方面出发,这样才能让大家从根本上知道蛋白质的检测方法。
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